使用CentriVap®Micro IR进行基因组DNA分离

加工DNA样品可能是一个耗时且昂贵的过程。如果在任何步骤期间发生降级,则该过程必须重新开始。在开始之前,确保DNA没有RNA和蛋白质污染。为了防止核酸酶对试剂的污染,请始终佩戴无粉实验室手套,并使用专用溶液和带无核酸酶气雾剂吸头的移液器。避免含有DNA或酶的溶液反复冻融。按照下述步骤从血液,细胞或冷冻组织中分离DNA,以确保成功的实验。

使用CentriVa p微IR真空浓缩器进行DNA加工的一般步骤是:

1)加入去污剂去除脂质。
一个。向收集的样品中加入盐水 - 柠檬酸钠(SSC)缓冲液。b。以12,000RPM离心1分钟c。除去上清液,加入更多的SSC缓冲液。d。离心1分钟并除去所有上清液

2)去除蛋白质
a。加入乙酸钠,SDS缓冲液和蛋白酶K,涡旋; 在55℃下孵育1小时
。加入苯酚/氯仿/异戊醇并涡旋。以12,000RPM离心样品2分钟

3)用乙醇沉淀DNA 
a。将水层移**1.5ml微量离心管中; 加入100%乙醇。
b。涡旋并在-20°C孵育15分钟
。以12,000RPM离心2分钟,倾析上清液,然后排干
d。加入缓冲液,混合并在55℃下孵育10分钟。
e。加入乙酸钠,混合。加入乙醇,混合,然后再次离心。
F。滗析上清液,用80%乙醇冲洗沉淀。离心1分钟。

4)使用Labconco's CentriVap micro IR从上清液中蒸发醇。
一个。在蒸发阶段,进行蒸发冷却,使样品比聚集器中的实际设定点更冷。样品有时会变得很冷,它们会冻结。
b。在干燥阶段的前15分钟将CentriVap微IR设置为50℃。
C。15分钟后,将温度降**35℃,然后取样**干。

5)存储样品
a。将沉淀重悬在TE缓冲液中; 在55℃温育过夜。
b。将样品储存在-20°C。