细菌和真菌的保存方法

  • 生物保存是保存细胞完整性和功能的过程。
  • 大多数细菌实验室都为教育,研究,生物测定,工业或其他目的维护微生物的原种培养。
  • 各种各样的技术可用于细菌的保存,并且可能难以为特定菌株选择方法,这不仅可以确保生存,而且还可以确定基因型及其独特特性不会改变。 
  • 保存培养物的主要目的是保持生物体的存活,不受污染且没有变异或突变,也就是说,将培养物保存在与原始分离株尽可能接近的条件下。

琼脂偏斜培养

  • 所有微生物实验室都将微生物保存在琼脂斜面上。
  • 接种琼脂斜面并孵育直至出现良好的生长。
  • 然后将它们用无菌矿物油覆盖至倾斜表面**上方1厘米的深度。
  • 将斜面孵育24小时或更长时间,然后将其存储在冰箱中。
  • 这些文化定期转移到新鲜的媒体。
  • 通过去除充满生长的环,将环接触玻璃表面以排出多余的油,接种新鲜的培养基,然后保留**初的原种培养,进行转移。
  • 进行转移的时间间隔随生长的起源和条件而变化。
  • 这是一种简单,**经济的保存细菌和真菌的方法,它们在室温下可以存活数年。

冷藏

  • 纯培养物可以成功地在0-4°C的冰箱或冷藏室中保存。
  • 此方法适用时间短(细菌需要2-3周,真菌需要3-4个月),因为微生物的代谢活动会大大减慢但不会停止。
  • 因此,它们的生长持续缓慢,营养物质被利用,废物在介质中释放。**终导致一段时间后微生物死亡。

石蜡法

  • 这是维持细菌和真菌纯培养物的一种简单且**经济的方法。
  • 在这种方法中,将无菌液体石蜡倒入培养物的斜面(斜坡)上,并在室温下直立保存。
  • 石蜡层可确保厌氧条件并防止培养基脱水。
  • 这种条件有助于微生物或纯培养物保持休眠状态,因此,该培养物可保存数年。

盐悬浮液

  • 高浓度的氯化钠通常是细菌生长的抑制剂。
  • 将细菌悬浮在1%的盐溶液中(螺帽管内的浓度应达到致命浓度,以防止蒸发)。
  • 试管在室温下保存。每当需要时,均在琼脂斜面上进行转移。

冷冻保存

  • 冷冻保存(即在196°C的液氮中冷冻)有助于长时间保存纯培养物。
  • 在这种方法中,在稳定剂如甘油的存在下,将培养的微生物在-196°C的液氮中迅速冷冻,以防止冰晶形成并促进细胞存活。

冻干(冷冻干燥)

  • 在这种方法中,将培养物在非常低的温度(-70°C左右)下快速冷冻,然后通过真空脱水。
  • 在这些条件下,微生物细胞脱水,其代谢活动停止;结果,微生物进入了休眠状态并保持了数年的生存能力。
  • 冻干或冷冻干燥的纯培养物,然后密封并在4°C的黑暗条件下在冰箱中储存。
  • 冷冻干燥法是培养物收集中心**常用的技术。

冻干过程

  • 在此过程中,将微生物悬浮液放入小瓶中。
  • 在-78 o C 的温度下,通过在干冰(固态二氧化碳)和酒精或丙酮的混合物中旋转薄膜,将薄膜冷冻在小瓶的内表面上。
  • 样品瓶立即连接到高真空管线。这使仍在冷冻的生物干燥。
  • **后,将安瓿瓶在真空中用小火焰密封。
  • 这些培养物可以在40°C下保存几年。
  • 该方法还用于保存毒素,血清,酶和其他生物材料。
  • 要使微生物培养物恢复活力,只需要在无菌条件下打开小瓶,添加合适的陈旧培养基,孵育后再进行进一步转移即可。
  • 该方法允许维持更长数量的培养物而不会改变培养物的特性,并大大降低了污染的危险。

低温保存

  • 生物体悬浮在含有15%甘油的营养肉汤中。
  • 将悬浮液冷冻并储存在-15℃至-30℃。

真空干燥保存

  • 将有机物在真空中用氯化钙干燥,然后存储在冰箱中。